微生物学通报:家蝇抗菌肽 AMP-17 对白色念珠菌菌丝的抑制作用
虽然抗真菌治疗手段较多,但临床上预防和治疗白色念珠菌病的药物非常有限[5]。当前临床上使用的抗真菌药物多为单靶点抗代谢的化学合成药物,极易产生耐药[6]。此外,抗真菌药物的不良反应限制了药物的应用[7]。因此寻找新型药源、研发安全有效的抗真菌感染药物已刻不容缓。抗菌肽(antimicrobial peptide,AMPs)是一类由生物体免疫防御系统产生的天然抗菌分子,是生物体抵御病原体感染的一类天然多肽,具有抗菌谱广、毒性低,不易产生耐药等优点,是极具发展前景的新一代“抗生素”。有研究发现抗真菌肽 MAF-1A 作用于白色念珠菌后可明显抑制芽生孢子的生成和芽管的形成[8]。乳球菌产生的抗菌肽 Nisin Z 不仅能抑制白色念珠菌的生长,还能阻断白色念珠菌由酵母态向菌丝态的转化[9]。目前抗菌肽已经在试验和临床诊治中取得良好效果,充分说明抗菌肽已经是研究和开发新型抗真菌药物的一个有效途径[10-11]。
自 2000 年以来,课题组以病媒昆虫家蝇为研究对象,采用生物化学及分子生物学方法从蝇体内分离纯化或克隆表达了多个抗菌肽分子[12-13]。AMP-17 是课题组从微生物诱导的家蝇转录组数据库 筛 选 到 一 条 特 异 性 高 表 达 基 因 , 其 功 能 在GenBank 上尚无注释,是一未知功能基因。我们利用基因工程技术,采用原核表达系统克隆表达获得重组 AMP-17 蛋白,体外研究显示重组蛋白具有显著的抗真菌效果,特别是对白色念珠菌具有较强的抗菌活性[14],理化特性研究显示,AMP-17 重组蛋白具有较强的热稳定性,耐高温及反复冻融,高浓度下对人红细胞基本没有溶血性(另文报道),提示了其潜在的药物价值。然而 AMP-17 对临床株白色念珠菌的抗菌效果及能否干扰念珠菌菌丝的形成尚不清楚。因此本研究从 AMP-17 作用后白色念珠菌的形态转化方面着手,探讨 AMP-17 对白色念珠菌菌丝的作用,为进一步研究抗菌肽对生物被膜的影响提供前期的数据支持,也为抗菌肽的应用提供一定的实验依据。
本研究结果表明,AMP-17 不仅能够很好地抑制芽生孢子的生成及芽管的形成,而且可以较好地抑制白色念珠菌菌丝的生长。AMP-17 对白色念珠菌酵母态的 MIC 值是 FLC 的 20 倍,即 AMP-17 对酵母态的抗菌活性要弱于 FLC,但低浓度(20 μg/m L)的 AMP-17 对芽生孢子和芽管形成的抑制效果较高浓度(100 μg/m L)的 FLC 明显。这为抗菌肽临床治疗白色念珠菌提供了可靠的实验依据,对开发抗真菌药物具有重要意义。
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碳氮比的概念和优化方法
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