【问题回复】当有玉米浆等物质时怎么检测生物量
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根据粉丝提出的问题，于2024年6月更新，若有不足可留言。
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▶微生物检测方法分为直接法和间接法，在这里之所以将平板计数也归为直接法，是因为该方法不需要额外的仪器设备，将其归为间接法也是可以的。需要注意的是平板计数的方法是活菌计数，显微计数在特定染料处理后也可以进行活菌计数，并可以对不同类型微生物进行区分，比如革兰氏染色，流式细胞仪可以进行更为复杂的计数和分离。
▶比浊和重量法都是我们常用的衡量生物量的方法，不多做解释。代谢法在这里是指通过微生物代谢活动间接衡量生物量的方法。不同数量的微生物，其底物的消耗，产物的生成，遗传因子的数量等都是不同的。比如通过测量DNA含量，总氮，总碳，基于微生物生长动力学的生物量模型，还有当前比较热门的的微生物组学的方法，也是通过对rna，特定基因（Cpn60蛋白，rpoB一般为一些保守的基因）的含量进行计数的。
▶因此我们需要根据实际情况选择，建立适合自己的微生物生物量的检测方法。
一直认为在复杂的培养基中霉菌是没有办法计数的，今天介绍一个国标的计数方法。
▶常用方法
如果使用没有固形物的或者固形物含量较低的培养基，霉菌生物量可以用干重和湿重来衡量。这也是非常行之有效的方法。
▶霉菌平板计数
稀释涂布，然后平板计数是我们常用来测细菌、酵母等单细胞微生物生物量的方法，但是如果用这种方法来测定霉菌的生物量该如何测定呢？国标
GB 4789.15-2016（https://kdocs.cn/l/cp9JXROMZvCJ）给出了答案：
对于没有办法测定湿重和干重的情况下，平板计数可以作为一种选择，其准确性有待验证。
▶显微计数
同样，利用显微镜计数方法也是我们经常用来对酵母、细菌等单细胞微生物计数。但是利用显微镜怎么对丝状真菌进行计数呢？
▶HHD-20郝氏计测玻片，又叫霍华德霉菌计数板，包括载玻片、盖玻片和配片（侧位计），用于计算霉菌的数量，主要应用于食品卫生检验领域。
有时候我们的物料中或者发酵制品中含有多种不同属的，不同种的微生物。在衡量产品性能的时候有时候需要对不同微生物进行分别计数。我们对不同微生物进行分别计数要建立在微生物鉴定的基础上。
▶细胞形态
微生物可以分为多种形态，球菌，杆菌，芽孢，大的酵母。如果我们需要计数的不同微生物具有明显的细胞形态和大小差异，可以用显微计数方法来对不同的微生物进行分别计数。
▶染色
重要参考文献：多种乳酸菌混合制剂及发酵乳活菌计数方法的研究
以玉米浆为例，很显然玉米浆糖蜜这些副产物本身就含有大量的色素，固形物，肯定会使得培养基颜色发生变化，由于其中含有大量盐，产生沉淀在所难免。这种情况怎么测定生物量就成为了一个难题。根据我们的经验，提以下几点建议。
▶这类培养基原料使用前可以离心，去除里面的沉淀。当然这可能会影响培养基组成，需要综合考虑，有得就有失。也可以在取样后进行低速离心后采取比浊法，需要去尝试。
▶当该类成分浓度固定时，对样品进行稀释，并以未接种的培养基为对照，也是可以对菌体浓度进行估计。
▶采取间接法中的代谢法。
▶平板法是肯定可以用的，只是比较费劲，通量较低。
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碳氮比的概念和优化方法
碳氮比（C/ N） ：严格意义上应是指在微生物培养基中所含的碳源中的碳原子摩尔数与氮源中的氮原子摩尔数之比。（周德庆微生物学教程），在这里，我认为对于既能做碳源又能做氮源的物质应该及计算碳源又计算氮源。很多情况我们简单用培养基的碳源和氮源的比值来替代，但这是不准确的。另外由于一些培养基成分中的碳源不易利用，碳氮比也有用还原性碳源和粗蛋白之间的比值来替代，比如下式碳氮比的计算,就是用葡萄糖中的碳元素的摩尔浓度比上总蛋白中氮元素的摩尔质量浓度。
넶4335 2021-09-09 -
【发酵基础】P1，P2，P3，千级、万级和十万级，关于微生物实验室的安全和洁净
넶2608 2020-05-08 -
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【发酵基础】常用灭菌、消毒、除菌和防腐方法及其特征
染菌与控制是发酵圈永远绕不开的话题。降低染菌率是每一个发酵人应该认真学习和考虑的问题。而合理的应用灭菌、消毒和防腐方法是我们必备的技能。这也是我们在详细介绍发酵过程染菌防控之前需要介绍的内容之一。
넶1347 2020-04-29 -
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风波后董宇辉更火，我更加明白：阅读的厚度，决定人生的高度！
넶64 2024-05-03
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关于Western Blot 你想要的都在这里
Western Blot（蛋白质免疫印迹）是细胞与分子生物学领域中常用的核心技术之一，其核心原理是通过凝胶电泳实现蛋白质的分子量分离，再将分离后的蛋白质转移至固相支持膜（如硝酸纤维素膜、PVDF膜），最后利用抗原与抗体的特异性结合反应，实现目标蛋白质的定性与半定量检测。该技术凭借高特异性、高灵敏度的优势，能够从细胞或组织提取的复杂蛋白质混合物中精准识别目标蛋白，为蛋白质相关研究提供直接的实验依据。
从技术本质来看，Western Blot的实现依赖三大关键环节：一是基于分子量的分离，利用SDS-PAGE凝胶的分子筛效应，使不同分子量的蛋白质在电场中呈现不同迁移速率，从而实现分离；二是固相转移，通过电场作用将凝胶中的蛋白质转移至膜上，形成稳定的蛋白印迹；三是特异性标记与检测，借助一抗对目标蛋白的特异性识别和二抗的信号放大作用，结合化学发光、荧光等检测方式，最终实现目标蛋白的可视化。相较于其他蛋白质检测技术，Western Blot兼具分离与鉴定功能，且操作流程相对可控，是生命科学研究中蛋白质分析的基础手段。 -
真菌毒素标准品
真菌毒素，衍生物标准品
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微生物课件
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微生物课件
