自诱导培养基在甲醇毕赤酵母诱导外源蛋白中的应用

Auto-induction of Pichia pastoris AOX1 promoter for membrane protein expression

 

       甲醇毕赤酵母已经被广泛应用在酶制剂，医药等领域，已经有很多蛋白在毕赤酵母体系中成功表达并工业话应用。

       毕赤酵母表达体系具有比较复杂的过程，细胞增殖，诱导产酶必须严格分开，   以接触增殖培养基中甘油和葡萄糖的抑制作用。在摇瓶中，我们采取置换培养基，发酵罐中通过饥饿来实现解除甘油或葡萄糖的抑制。

       作者通过优化获得了自诱导培养基（BYGM）：100mM PBS(6.0)，2.68% YNB，0.4%甘油，0.5%甲醇，8*10-5%生物素。      

      BMMY/BMGY培养基：酵母粉：1.0克，蛋白胨：2.0克，YNB：1.34克，0.1mol/L pH6.0(或者pH7.0)磷酸缓冲液，甘油：1.0毫升，加蒸馏水到100mL

      BMG培养基：100 mmol/L K3PO4, 1.34% YNB, 0.00004% biotin, 1% glycerol

      BYGM培养基是在BMG培养基基础上优化设计出的，作者通过设计不同水平的甘油含量，生物素含量，YNB含量，甲醇是否加入等条件，得出以下结论：

• 2%的甘油完全抑制产酶

• 在1%的甘油的前提下，2倍的YNB和生物素能够增加产量

• 直接加入0.5%的甲醇成功的自诱导出目的产物，而且和人工置换培养基效果相同

• 进一步对甘油浓度进行优化，确定0.4%的甘油浓度具有较好的表达效果

其培养基中增加了YNB的含量，降低了甘油的含量，并加了甲醇。作者通过对YNB含量和甘油含量的优化，最终得出自诱导培养基（BYGM）：100mM PBS(6.0)，2.68% YNB，0.4%甘油，0.5%甲醇，8*10-5%生物素。

作者在3L培养基中进行了放大，并取得了成功。进一步作者还在不同的表达系统，表达不同的外源蛋白情况下，测试了该培养基，并取得了成功。

    重点：一般情况下，BMGY或BMG培养基中甘油含量是过量的，如果控制较低的含量，在菌体增值完全后，甘油含量正好消耗完全，可以直接添加甲醇进行诱导，关键在于甘油量的控制。

 

问题：

BMGY培养基是否可行？

工业上用的无机盐培养基是否可行，有没有必要。工业生产种一般有四个阶段，增值阶段，甘油补料阶段，饥饿阶段，甲醇诱导阶段，由于受到设备条件限制，甘油补料阶段一般就放弃进行，那么如果在增值阶段直接添加甲醇，让菌体提前适应甲醇，在溶氧反弹直接诱导是否可行？

至于该方法是否真的可行，需要实验室进行实验，希望知道结果的同学们可以持续关注。