毕赤酵母培养基优化

很少有人对毕赤酵母培养基进行优化，一般都会选择手册上推荐的培养基进行表达，并对其中的诱导甲醇浓度，甲醇添加时间，装液量，诱导生物量等条件进行优化，严格来说并不能算培养基优化。

BMGY/BMMY

1%酵母浸出物，2%蛋白胨，100 mM磷酸钾 PH6.0， 1.34% YNB  4×10-5%生物素，1%甘油或 0.5%甲醇

YNB

YNB配方  

而推荐用的发酵罐培养基是无机盐培养基，发酵罐培养基和摇瓶培养基有一定的脱节，有相关文章也做了培养基的优化，可以学习。

利用麦芽汁，麸皮等做培养基

在毕赤酵母发酵培养基中引入麦芽汁，麸皮，玉米浆等廉价的有机原料，其中以麦芽汁效果比较明显。

无机盐培养基的改良

有很多文章对毕赤酵母的最佳碳源和氮源进行了优化，大多优化结果还是以甘油为最佳碳源，甘油浓度为4%-5%，硫酸铵为最佳氮源，部分结果比较异常：麸皮，麦芽汁为最佳碳源。因此大多情况下以甘油为碳源，以氨水流加作为氮源是合理的，有些情况补加一部分有机氮源对产酶有正面的影响。剩下的就是对无机盐培养基成分进行改良，寻找适合自己菌株的配比。

培养基优化的目的和关键点

• 手册中推荐的培养基中各无机盐含量偏高。对菌株产酶并一定是好事，因此需要优化。

• 需要对Ga，K,Mg，等离子的量进行优化，以排除其对产酶或者酶制剂本身的抑制作用。

• PTM1或者PTM4中大量的微量元素也需要优化，以排除对酶制剂不利的微量元素，选择对酶制剂有利的微量元素。

• 生物素添加量的优化，有些文献中报道，生物素都可以不加，因此有必要对其添加量进行优化，过高的生物素，反而会导致过快的生长，影响表达。

• 其他一些成分对产酶的影响：油酸，组氨水，表面活性剂，蛋白酶抑制剂，蛋白酶作用底物。油酸是一种能诱导过氧化物酶体产生的碳源, 对 P.pastoris 而言可能是产生的过氧化物酶体协助氧化了 AOX1 氧化甲醇而产生的过氧化物 ,以减轻对细胞的伤害 , 进而提高了 AOX1 的稳定性和活力。组氨酸缺陷菌株要考虑组氨酸的加入，如果目的蛋白降解比较严重，可以考虑适当加入蛋白酶抑制剂或者蛋白酶的作用底物。

• 一些文献供参考

• 刘生峰. 植酸酶基因在毕赤酵母中高效表达及工程菌培养基初步优化[D]. [出版地不详]: 西南农业大学, 2004.

• 吴迎春. 毕赤酵母表达XRN1蛋白及响应面法优化基础盐发酵培养基[D]. [出版地不详]: 浙江理工大学, 2013.

• 杨浩,胡华,罗鹏程,等. Plackett-Burman设计与响应面法优化毕赤酵母产重组抗菌肽LL-37发酵培养基[J]. 检验医学与临床, 2016, 13(19): 2703-2705.

• 王平章. 植酸酶phyA基因转化毕赤酵母的筛选及工程菌培养基研究[D]. [出版地不详]: 四川农业大学, 2002.

•  虞凤慧,徐泽平,周传兵,等. 毕赤酵母工程菌产高温碱性脂肪酶发酵培养基的优化[J]. 食品与机械, 2014, 30(4): 196-199, 210.

• 王平章. 植酸酶phyA基因转化毕赤酵母的筛选及工程菌培养基研究(1)[D]. [出版地不详]: 四川农业大学, 2002.

• 徐爱才. 甜蛋白Monellin在毕赤酵母中的表达及响应面法优化发酵培养基[D]. [出版地不详]: 武汉工业学院, 2011.

• 王海宽,路福平. 培养条件对甲醇毕赤酵母异源表达木质素过氧化物酶...[J]. 天津科技大学学报, 2007, 卷缺失(1): 33-36.

• 何锡杲. 植酸酶基因工程菌E22的发酵工艺研究[D]. [出版地不详]: 西南大学, 2006.

• 焦龙. 毕赤酵母工程菌pk53产纤溶酶发酵的优化研究[D]. [出版地不详]:河北农业大学, 2011.

• 王平章. 植酸酶phyA基因转化毕赤酵母的筛选及工程菌培养基研究(1)[D]. [出版地不详]: 四川农业大学, 2002.

• 佚名. 重组毕赤酵母生产人生长激素的发酵条件研究---硕士论文[J]. 刊名缺失, 出版年缺失, 卷缺失(期缺失): 页码范围缺失.